3730XL DNA Analyzer开放时间：

一． 开学期间：

A) 正常工作时间段：周一至周五，时段：8:00-18:00，接收待测序样品；

B) 非正常工作时间段：周一至周五，时段：18:00-次日8:00，周六至周日及学校法定节假日全天，测序样品请投入仪器中心127房间外样品箱中。

二． 寒暑假期间：

A)正常工作时间段：周一至周五，时段：9:00-17:00，接收待测序样品；

B) 非正常工作时间段：周一至周五，时段：17:00-次日9:00，周六至周日全天，待测序样品请投入仪器中心127房间外样品箱中。

样品递交说明：

一． 样品信息单

用户需详细填写“测序登记表”，所有样品需随同“测序登记表”一起递交。若样品数较多，可以递交电子版本，您只需在送样前将填写完整的excel表格发送至microimage@pku.edu.cn即可。

二． 送样要求：

1）菌液：

请提供1.2mL左右的新鲜菌液装在1.5mL的离心管中并封好，我们会直接进行质粒提取。

2）质粒：

要求样品稀释浓度至50-100 ng/uL, 提供10uL以上。OD260/OD280=1.6-2.0, OD260/OD230=1.6-2.0；

3）PCR产物：请随样品提供电泳胶图，确定PCR产物为单一扩增条带。

若提供已纯化好的PCR产物，条带必须单一，OD260/OD280=1.6-2.0, 最好溶解在已灭菌的去离子水中。浓度要求>10ng/uL，提供10uL以上。

4）RCA样品：请随样品提供电泳胶图。用无菌水稀释3倍。

5）自带引物必须用水稀释至1uM。

三．测序引物要求：

    测序质量，测序用引物的要求较高，引物的3’端必须与模板完全匹配。

用于测序的引物一定要经过PAGE纯化，纯度应>90%，溶解在已灭菌的去离子

水中。此外，测序引物长度最好在17-24bp，GC含量在50-60%左右。请一定在

测序单上详细填写好提供引物的浓度。

测序周期：

一． 最佳收样时间：8：00-11:00，当日即可获得测序结果；

二． 若11:00之后送样，第二天获得测序结果；

三． 菌液和PCR未纯化样品，执行周期最迟约48小时后发送测序结果；

四． 若有加急样品，与仪器中心老师沟通约定。

 测序结果：

一． 正常情况下，3730XL DNA Analyzer至少保证800bp的有效测序长度。测序完成后，我们会对每个样品提供一份测序报告，其中包括：测出的序列彩峰图和序列文件；

二． 在进行DNA测序时，紧邻引物的20-40bp测序准确性偏低；

三． 出现DNA模板上的特殊结构，比如：G/C rich; Poly A/T/C/G连续结构等，将会出现测序反应中断无法进行测序的情况；另外，若DNA模板结构中的重复序列，致使测序引物和模板之间有两个有2个以上的结合位点，将会产生反应中途出现套峰现象。类似以上情况由于DNA结构原因造成无法正常进行DNA测序，我们会根据具体测序结果进行相应收费。

四． 对测序结果不好的样品，我们会及时跟相关的老师同学沟通，尽力找到可能的原因，改善实验操作。

样品后期保存：

测序结束后会，我们保存相关样品3天。若有返还样品要求，请及时与我们联系。电话：010-62768301  董老师 李老师